El medio de cultivo para orquídeas sustituye al hongo de la naturaleza: aporta azúcar, sales, vitaminas y un soporte gelificado. Aquí tienes dos fórmulas probadas, una para siembra y otra para repique, con el procedimiento completo y los errores que hacen que un medio falle semanas después.
Este artículo forma parte de la serie Cultivo in vitro de orquídeas paso a paso: corresponde a la fase 3 de 9.
Lo que vas a aprender
- Cada componente tiene una función: sales, vitaminas, azúcar, aditivos orgánicos, carbón y agar.
- pH 5,6–5,8 medido con todo disuelto y antes del agar.
- Para qué: medio de germinación de semilla de orquídeas epífitas.
- Clave técnica: el pH (5,7) se mide con todo disuelto y antes del agar.
- P668 a dosis completa: ya contiene sacarosa y carbón.
- Plátano maduro triturado con agua y agua de coco filtrada.
Materiales necesarios
| Necesario | Alternativa disponible |
|---|---|
| Balanza de precisión (0,01 g) | — |
| pHmetro y patrones de pH 4 y 7 | Tiras de pH (solo orientativo) |
| MS con vitaminas y P668 | — |
| Agar bacteriológico o para cultivo vegetal | — |
| Carbón activado | — |
| Agua de coco fresca y plátano maduro | — |
| Hidróxido de potasio o sodio y ácido clorhídrico diluidos | — |
| Frascos de vidrio con tapa de polipropileno (PP) | — |
| Jarra de pico fino o jeringa de 50–60 ml | Embudo de cuello largo |
Fundamentos del medio de cultivo
Objeto
Explicar la función de cada componente de los medios de esta guía, para entender qué ocurre si se cambia una cantidad o un ingrediente.
Componentes
| Componente | Función | Observaciones |
|---|---|---|
| Sales minerales (MS, P668) | Aportan nitrógeno, fósforo, potasio, calcio, magnesio y micronutrientes. | En orquídeas se usa a menudo el MS a media concentración, con menos sales que la fórmula completa. |
| Vitaminas | Cofactores del metabolismo; la más habitual es la tiamina. | El MS «con vitaminas» ya las incluye. |
| Sacarosa | Fuente de carbono y energía: sustituye al hongo de la naturaleza. | Entre 10 y 30 g/L en medios de orquídeas; 20 g/L es lo habitual. |
| Agua de coco | Aporta azúcares, aminoácidos, minerales y citoquininas (hormonas que estimulan la división celular). | Su composición varía según el coco y su madurez: cada lote puede comportarse distinto. |
| Plátano | Aporta azúcares, potasio y otros compuestos que favorecen el crecimiento de plántulas en muchas orquídeas. | Composición variable; oscurece el medio. Se usa sobre todo en repique y mantenimiento. |
| Carbón activado | Adsorbe compuestos fenólicos tóxicos y oscurece el medio, lo que favorece el desarrollo de raíces. | También retiene parte de las vitaminas y hormonas del medio. Debe ser activado, no carbón vegetal común. |
| Agar | Gelifica el medio para que las semillas y plántulas queden en superficie. | Su firmeza depende de la marca y del pH: por debajo de pH 5 y tras esterilizar, gelifica peor. |
El pH
- El pH condiciona qué nutrientes puede absorber la planta y la firmeza del agar. En medios de orquídeas se ajusta a 5,6–5,8.
- Se mide con todos los componentes disueltos, incluidos el agua de coco y el plátano, y antes de añadir el agar. Ajustar solo el agua no sirve: las sales, el carbón y los aditivos lo modifican.
- La esterilización suele bajar el pH unas décimas; por eso se ajusta al valor objetivo antes y no se corrige después.
- Se mide con pHmetro calibrado con soluciones patrón de pH 4 y 7. Las tiras de papel son orientativas.
Los dos medios de esta guía
| Por litro | Medio A · Siembra | Medio B · Mantenimiento y repique |
|---|---|---|
| Base mineral | MS con vitaminas: 2,2 g (media dosis de una etiqueta de 4,4 g/L) | P668: 27,31 g (dosis completa) |
| Sacarosa | 20 g | No se añade: el P668 ya la contiene. |
| Agua de coco | 100 ml | 50 ml |
| Plátano maduro | — | 50 g |
| Carbón activado | 2 g | No se añade: el P668 ya lo contiene. |
| Agar | 6 g (bacteriológico o para cultivo vegetal) | 8 g (el P668 no lleva agar). |
| pH | 5,7 | 5,7 |
| Agua destilada | Hasta completar 1 litro | Hasta completar 1 litro |
El P668 es un medio comercial de PhytoTech desarrollado para el cultivo de Phalaenopsis a partir de varas florales y usado hoy como medio de siembra y repique para muchas orquídeas epífitas. Contiene carbón, sacarosa y peptona, y no contiene agar.
Conservación de los productos
- MS y P668 en polvo: envase bien cerrado, en frío (2–8 °C) y seco, según la etiqueta. Absorben humedad.
- Agua de coco: usar fresca y filtrada el mismo día. Si sobra, se puede congelar en porciones etiquetadas.
- Plátano: maduro, sin zonas podridas, triturado en el momento.
Paso a paso: Preparación del medio A · Siembra (MS + agua de coco)
MS a media dosis con agua de coco y carbón activado
Por qué importa
El medio A es la única fuente de alimento de la semilla durante las primeras semanas. Un error de pesada o de pH no se ve el día de la preparación: aparece semanas después, como semillas que no germinan o un agar que no cuaja. Por eso este procedimiento se trabaja con casillas para marcar a mano y con indicadores que convierten la calidad del medio en un número.
Fórmula
| Componente | 1 litro | 500 ml | 250 ml |
|---|---|---|---|
| MS con vitaminas (etiqueta 4,4 g/L) | 2,2 g | 1,1 g | 0,55 g |
| Sacarosa | 20 g | 10 g | 5 g |
| Agua de coco fresca, filtrada | 100 ml | 50 ml | 25 ml |
| Carbón activado | 2 g | 1 g | 0,5 g |
| Agar bacteriológico o para cultivo vegetal | 6 g | 3 g | 1,5 g |
| Agua destilada | hasta 1000 ml | hasta 500 ml | hasta 250 ml |
| pH antes del agar | 5,7 | 5,7 | 5,7 |
Quieres 18 frascos con 28 ml cada uno: 18 × 28 = 504 ml. Suma un 10 % por lo que queda en la jarra y en el embudo: 504 × 1,10 ≈ 555 ml. Prepara 600 ml (columna de 500 ml × 1,2): te sobrará un frasco de reserva.
🧮 Calcula las cantidades para tu número de frascos con la calculadora de medio de cultivo.
Material y equipo
| Equipo | Consumibles |
|---|---|
| ☐ Balanza de precisión (0,01 g) | ☐ MS con vitaminas, sacarosa, agar |
| ☐ pHmetro y patrones de pH 4 y 7 | ☐ Carbón activado (no vegetal) |
| ☐ Jarra resistente al calor y varilla | ☐ Agua de coco fresca y filtrada |
| ☐ Jarra de pico fino o jeringa de 50–60 ml | ☐ Agua destilada |
| ☐ Frascos con tapa de PP y papel de aluminio | ☐ Hidróxido de potasio o sodio y ácido clorhídrico diluidos (0,1–1 M) |
Procedimiento
- Calibra el pHmetro con los patrones de pH 4 y 7 y anota el lote de cada producto en tu hoja de registro. (≈ 5 min)
- Vierte 700 ml de agua destilada, añade el MS y remueve hasta que no quede polvo en el fondo. (≈ 5 min)
- Añade la sacarosa, después el agua de coco y, por último, el carbón activado. (≈ 5 min)
- Completa hasta unos 950 ml y ajusta el pH a 5,7 (ver la técnica). Anota el pH inicial y el final. (≈ 10 min)
- Completa hasta 1000 ml, añade el agar en lluvia y calienta removiendo hasta que hierva y quede disuelto. (≈ 15 min)
- Reparte en caliente, 25–30 ml por frasco, removiendo entre frasco y frasco. (≈ 15 min)
- Tapas sin apretar, aluminio, etiqueta «Medio A» con lote y fecha, y a la olla el mismo día (Cómo esterilizar el medio de cultivo en olla a presión y hacer la cuarentena). (≈ 5 min)
- Mide a temperatura ambiente: el pH cambia con la temperatura.
- Una gota, remueve 30 segundos y espera a que la lectura se estabilice.
- A menos de 0,3 unidades del objetivo, cambia a una solución diez veces más diluida.
- Si te pasas, corrige con la solución contraria y anótalo: cada corrección añade sales.
Usa una jarra de pico fino o una jeringa de 50–60 ml. El medio que queda en la rosca se contamina al cerrar y es una vía habitual de entrada de hongos en las primeras semanas.
Las sales, el coco y el carbón cambian el pH: un agua ajustada a 5,7 puede acabar mucho más baja con todo disuelto, y a pH bajo el agar cuaja peor tras esterilizar. El pH se mide con todo disuelto y antes del agar.
Haz
- Espolvorear el agar en lluvia sobre el líquido.
- Remover entre frasco y frasco para repartir el carbón.
- Esterilizar el mismo día de la preparación.
- Anotar pH inicial, pH final y reactivo usado.
Evita
- Añadir el agar de golpe: forma grumos que no se disuelven.
- Usar carbón vegetal común en lugar de activado.
- Guardar medio sin esterilizar.
- Corregir el pH después de la olla.
Si algo sale mal
| Síntoma | Causa probable | Qué hacer |
|---|---|---|
| Agar blando o líquido | pH demasiado bajo, poco agar o agar de baja calidad | Revisar el registro de pH; cambiar de marca antes de subir la dosis |
| Grumos en el medio | Agar añadido de golpe | Desechar; añadirlo en lluvia la próxima vez |
| Carbón acumulado en el fondo | Reparto sin remover | Remover entre frascos |
| Medio muy oscuro tras la olla | Exceso de calor | Revisar el tiempo de esterilización (Cómo esterilizar el medio de cultivo en olla a presión y hacer la cuarentena) |
| Hongos en la rosca durante la cuarentena | Medio en el cuello del frasco | Repartir con jarra de pico fino o jeringa |
Indicadores de calidad
Se calculan con los datos de tu hoja de registro y tu hoja de registro. Los objetivos son internos y provisionales: se revisarán cuando haya diez lotes registrados.
- Qué mide
- Lo cerca que queda el pH final del objetivo antes del agar.
- Fórmula
| pH final − 5,7 |- Objetivo
- ≤ 0,1 en cada lote
- Si no cumple
- Revisar la calibración del pHmetro y la técnica de ajuste.
- Qué mide
- La calidad conjunta de la preparación y la esterilización.
- Fórmula
frascos contaminados en cuarentena ÷ frascos del lote × 100- Objetivo
- 0 % por lote; revisar el ciclo de olla si supera el 5 %
- Si no cumple
- Ver el análisis del origen en Incubación y contaminación en frascos in vitro.
Lote M-2026-014: 20 frascos, 1 contaminado en cuarentena → 1 ÷ 20 × 100 = 5 %. Está en el límite: se libera el resto y se vigila el siguiente ciclo de olla con un integrador químico.
Paso a paso: Preparación del medio B · Mantenimiento y repique (P668 + plátano + agua de coco)
Objeto
Preparar el medio de mantenimiento y repique de protocormos y plántulas a base de P668 con plátano y agua de coco.
Fórmula
| Componente | 1 litro | 500 ml | 250 ml |
|---|---|---|---|
| P668 (contiene sacarosa y carbón; sin agar) | 27,31 g | 13,66 g | 6,83 g |
| Plátano maduro | 50 g | 25 g | 12,5 g |
| Agua de coco fresca, filtrada | 50 ml | 25 ml | 12,5 ml |
| Agar bacteriológico o para cultivo vegetal | 8 g | 4 g | 2 g |
| Agua destilada | Hasta 1000 ml | Hasta 500 ml | Hasta 250 ml |
| pH | 5,7 | 5,7 | 5,7 |
No añadir azúcar ni carbón: el P668 ya los contiene. Añadirlos duplicaría su concentración.
Material
- El mismo que en Medio de cultivo para orquídeas paso a paso, más una batidora para el plátano.
Procedimiento (para 1 litro)
- Calibrar el pHmetro con las soluciones patrón de pH 4 y 7.
- Pesar todos los componentes y anotar el número de lote de los productos comerciales en tu hoja de registro.
- Pelar el plátano, pesar 50 g y triturarlo con unos 200 ml de agua destilada hasta obtener un puré sin grumos.
- Verter unos 500 ml de agua destilada en el recipiente y añadir el P668, removiendo. El carbón queda en suspensión y parte del polvo no se disuelve del todo.
- Añadir el puré de plátano y 50 ml de agua de coco filtrada. Homogeneizar.
- Completar con agua destilada hasta unos 950 ml.
- Medir el pH removiendo y ajustarlo a 5,7. Anotar el pH inicial y el final.
- Completar con agua destilada hasta 1000 ml.
- Añadir el agar y calentar removiendo sin parar hasta que hierva y el agar quede totalmente disuelto.
- Repartir en caliente, removiendo: 30–50 ml por frasco, más volumen cuanto más grandes sean las plántulas.
- Colocar las tapas sin apretar, cubrir con papel de aluminio y esterilizar el mismo día (Fase 4).
- Etiquetar cada frasco con «Medio B», el código de lote del medio y la fecha.
Tritura el plátano con parte del agua del medio, no solo: el puré queda fino y se reparte igual en todos los frascos.
Duplica su concentración. El P668 ya los contiene: solo se añaden plátano, coco y agar.
P668 13,66 g · plátano 25 g · agua de coco 25 ml · agar 4 g · agua hasta 500 ml · pH 5,7. Da para unos 12 frascos de 40 ml.
Puntos críticos
- El pH se mide con el plátano y el coco ya incorporados: no se «autoajusta».
- Plátano maduro y sano; sin zonas podridas.
- Remover durante el reparto para que el carbón y el plátano queden repartidos por igual.
Lista de verificación
Marca cada punto mientras trabajas, no al final. Cualquier «no» merece una nota con lo que has hecho para corregirlo.
Preparación del medio
Lo esencial
- El medio sustituye al hongo de la naturaleza: le da a la semilla azúcar, sales y vitaminas.
- Medio A para sembrar (MS a media dosis + coco + carbón); medio B para repicar (P668 + plátano + coco).
- El P668 ya trae azúcar y carbón, pero no agar.
- El pH (5,7) se mide con todo disuelto y antes del agar.
- El agua de coco y el plátano varían de un lote a otro: por eso se anotan.
Pon a prueba lo aprendido
Vas a preparar 350 ml de medio A. ¿Cuánto MS, sacarosa, agua de coco, carbón activado y agar necesitas?
| Componente | Cantidad para 350 ml |
|---|---|
| MS con vitaminas | ______ g |
| Sacarosa | ______ g |
| Agua de coco | ______ ml |
| Carbón activado | ______ g |
| Agar | ______ g |
Solución: MS 0,77 g · sacarosa 7 g · agua de coco 35 ml · carbón activado 0,7 g · agar 2,1 g.
Del laboratorio GadesPlant: fotos y vídeos
Imágenes de nuestras preparaciones de medio, procedentes de medio de siembra, medio de mantenimiento, Medio de cultivo (I) y Medio de cultivo (II), cuyo contenido queda integrado en esta guía.
Nota: los vídeos muestran nuestras primeras fórmulas (2023). Las cantidades vigentes son las de esta guía: MS a media dosis para siembra y P668 a dosis completa para mantenimiento.
Preguntas frecuentes sobre el medio de cultivo para orquídeas
¿Qué medio uso para sembrar semillas de orquídea?
Un medio con sales a media concentración, sacarosa y aditivos orgánicos. En esta guía usamos MS con vitaminas a media dosis (2,2 g/L) con agua de coco y carbón activado; para repique, P668 con plátano y agua de coco.
¿A qué pH ajusto el medio de cultivo?
A 5,7 (entre 5,6 y 5,8), medido con todos los componentes disueltos y antes de añadir el agar. Ajustar solo el agua no sirve: las sales, el coco y el carbón lo modifican.
¿Hay que añadir azúcar o carbón al P668?
No. El P668 ya contiene sacarosa y carbón activado. No contiene agar, que sí hay que añadir aparte.
¿Por qué no cuaja el agar?
Las causas habituales son un pH demasiado bajo, poca cantidad de agar o un agar de baja calidad. Revisa el registro de pH antes de aumentar la dosis.
Referencias
- Murashige, T. y Skoog, F. (1962). A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, 15: 473–497.
- Arditti, J. (2008). Micropropagation of Orchids, 2.ª ed. Blackwell Publishing.
- George, E. F., Hall, M. A. y De Klerk, G.-J. (eds.) (2008). Plant Propagation by Tissue Culture, 3.ª ed., vol. 1. Springer.
- Thomas, T. D. (2008). The role of activated charcoal in plant tissue culture. Biotechnology Advances, 26: 618–631.
- Yong, J. W. H., Ge, L., Ng, Y. F. y Tan, S. N. (2009). The chemical composition and biological properties of coconut (Cocos nucifera L.) water. Molecules, 14: 5144–5164.
- PhytoTech Labs. P668 Orchid Maintenance Medium with Charcoal, without Agar: ficha de producto y certificado de análisis (phytotechlab.com).
- PhytoTech Labs. O6339 Orchid Maintenance/Replate Medium without Charcoal, Peptone, and Agar: hoja de información de producto (phytotechlab.com).
Descubre más desde GadesPlant
Suscríbete y recibe las últimas entradas en tu correo electrónico.
