Manual de desinfección para cultivo in vitro: índice

La desinfección para cultivo in vitro decide el resultado antes de sembrar: un medio rico en azúcar es tan buen alimento para una orquídea como para un hongo. Este manual reúne, en capítulos, todo lo que hemos documentado sobre desinfección de semillas, cápsulas, tejidos, instrumental y entorno de trabajo, además de la seguridad química y la gestión de residuos.

Respuesta rápida: si estás empezando, sigue primero la ruta en 9 fases: las fases 0, 1 y 4 resumen la desinfección imprescindible. Este manual es la consulta en profundidad: por qué funciona cada paso, qué hacer cuando algo falla y cómo adaptarlo a un laboratorio casero.

Por dónde empezar

Si necesitas…	Empieza por
Preparar la zona estéril y trabajar con seguridad	Fase 0 · Seguridad y zona estéril
Desinfectar una cápsula o semilla seca hoy	Fase 1 · Desinfección de semillas y cápsulas
Esterilizar medios y material	Fase 4 · Esterilización en olla a presión
Entender los fundamentos y los porqués	Capítulo 1 del manual
Resolver una contaminación	Fase 6 · Incubación y contaminación y capítulo 6

Capítulos

Capítulo	Qué resuelve
1 · Introducción y fundamentos	Qué es la desinfección in vitro, por qué es imprescindible y la lógica de un protocolo por fases.
2 · Identificar los contaminantes	Cómo reconocer hongos, bacterias y levaduras en el frasco.
3 · Materiales y reactivos	Qué necesitas y para qué sirve cada producto.
4 · Métodos de desinfección de semillas	Hipoclorito, agua oxigenada y alcohol: concentraciones, tiempos y enjuagues.
5 · Tejidos y explantos	Técnicas y precauciones especiales para material vegetal distinto de la semilla.
6 · Los 7 errores más frecuentes	Fallos habituales y cómo evitarlos.
7 · Entornos no estériles	Cómo adaptar el trabajo a una glovebox casera.
8 · Residuos químicos	Manejo seguro y eliminación de reactivos.
9 · Preguntas frecuentes y casos reales	Dudas y casos de la comunidad, con soluciones.

Anexos

Anexo	Contenido
I · Prevención y control de contaminación	Guía de referencia para prevenir y controlar la contaminación.
II · Prueba de tetrazolio (TTC)	Viabilidad de semillas: procedimiento de referencia (reescrito en octubre de 2026).
III · Agua oxigenada (H₂O₂)	Uso del peróxido de hidrógeno para desinfectar semillas y tejidos.
Checklist del capítulo 6	Lista de verificación para imprimir.

Descargas

Seguridad ante todo

Trabaja con guantes, gafas y en un lugar ventilado.
No mezcles nunca lejía con ácidos, amoniaco, alcohol ni agua oxigenada: se liberan gases tóxicos.
Consulta la ficha de seguridad de cada producto y sigue el capítulo 8 para eliminar residuos.

Revisión técnica de octubre de 2026

El manual se ha revisado capítulo a capítulo. Entre otros cambios, se ha eliminado cualquier referencia al uso de compuestos de mercurio (no deben usarse fuera de un laboratorio profesional), se han precisado concentraciones y tiempos, y se ha reescrito el anexo de tetrazolio. Cada capítulo conserva su historial de revisiones.

Preguntas frecuentes

¿Qué desinfectante es mejor para semillas de orquídea?

El hipoclorito sódico diluido (lejía sin detergentes) es el más usado y contrastado. El agua oxigenada es una alternativa útil. La clave es la concentración, el tiempo de contacto y un buen enjuague con agua estéril.

¿Hace falta desinfectar una cápsula verde?

Sí, pero solo por fuera: el interior de una cápsula verde intacta suele ser estéril, por eso se desinfecta la superficie y se abre dentro de la zona estéril.

¿Puedo desinfectar sin cámara de flujo laminar?

Sí. Una glovebox casera bien preparada permite trabajar con buenos resultados; el capítulo 7 explica cómo adaptar el protocolo a un entorno no estéril.