Guía de Prevención y Control de Contaminación en Cultivos In Vitro de Orquídeas, Protocolo TTC.
Nota de revisión (octubre de 2026): esta página se ha reescrito. La versión anterior incluía una tabla de concentraciones por género y una escala de color sin respaldo bibliográfico.
Prueba de viabilidad con tetrazolio (TTC) en semillas de orquídea
El cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) es incoloro. Las enzimas respiratorias de un tejido vivo lo transforman en formazán, de color rojo. Un embrión teñido de rojo se considera vivo; uno sin teñir, no viable. En orquídeas, la cubierta de la semilla dificulta la entrada del reactivo, por lo que hace falta un pretratamiento.
Procedimiento de referencia
- Toma tres repeticiones de al menos 100 semillas del lote.
- Pretratamiento para permeabilizar la cubierta: inmersión breve en hipoclorito diluido o remojo en agua o en solución de sacarosa durante varias horas. Enjuaga con agua destilada.
- Cubre la semilla con solución de TTC al 1 % en agua destilada o en tampón fosfato de pH cercano a 7.
- Incuba en oscuridad a unos 30 °C durante 24 horas.
- Observa con lupa o microscopio y cuenta, en cada repetición, los embriones teñidos de rojo y los no teñidos.
Cálculo e interpretación
- Viabilidad (%) = embriones teñidos ÷ semillas con embrión × 100. Las semillas vacías se cuentan aparte.
- Cada embrión se clasifica como teñido o no teñido; la intensidad del color no se convierte en un porcentaje. Los teñidos solo en parte se anotan como dudosos.
- El TTC indica que el embrión está vivo, no que vaya a germinar. Algunas bacterias también reducen el TTC.
- Las condiciones de pretratamiento e incubación se ajustan por especie comparando con una siembra de control.
Soluciones
- TTC al 1 %: 1 g en 100 ml de agua destilada o tampón. Guardar en frasco ámbar, en frío, y usar en pocos días.
- Tampón fosfato: 3,58 g de Na₂HPO₄·12H₂O y 1,36 g de KH₂PO₄ en 1 litro dan un tampón 0,02 M de pH cercano a 6,9. Ajustar a 7,0 con pHmetro.
- Seguridad: el TTC es nocivo; usar guantes y gafas.
Referencia: Van Waes, J. M. y Debergh, P. C. (1986). Adaptation of the tetrazolium method for testing the seed viability, and scanning electron microscopy study of some Western European orchids. Physiologia Plantarum, 66: 435–442.
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