🎯Objetivos

• Estandarizar el protocolo para el cultivo in vitro de semillas de orquídeas
• Optimizar la germinación y el desarrollo inicial de protocormos
• Garantizar la reproducibilidad y eficiencia del proceso
• Minimizar la contaminación microbiana durante el cultivo

🌸Géneros Aplicables

🧪Materiales y Equipos

⚗️Reactivos y Medios de Cultivo

🔬Procedimiento Detallado

1. Recepción y Registro

1. Verificar fecha de recolección, especie y estado sanitario de las semillas
2. Registrar datos en formato de recepción (especie, lote, procedencia, fecha)
3. Evaluar viabilidad visual preliminar

2. Almacenamiento Previo

1. Secar semillas a 22-25°C con humedad relativa del 30-40%
2. Almacenar en bolsas de papel selladas a 4°C hasta el procesamiento
3. Etiquetar correctamente con información completa

3. Hidratación Controlada (24 horas)

1. Sumergir semillas en solución de glucosa al 3% en frascos estériles
2. Incubar a 25°C en oscuridad total durante 24 horas
3. Observar hinchamiento de las semillas

4. Desinfección Superficial

1. Preparar solución de H₂O₂ al 30% diluida con 70% agua destilada estéril
2. Sumergir semillas durante 5 minutos exactos
3. Enjuagar tres veces consecutivas con agua destilada estéril
4. Escurrir completamente antes del siguiente paso

5. Inoculación y Cultivo In Vitro

1. Preparar medio P668 fórmula coco para semillas
2. Esterilizar 20 mL de medio por frasco en autoclave (121°C, 15 min)
3. Usar jeringuilla estéril para depositar 5-10 semillas por frasco
4. Sellar frascos e incubar a 25°C con fotoperiodo 16/8h (40 µmol m⁻² s⁻¹)
5. Tras 4-6 semanas, transferir protocormos al medio P668 fórmula plátano

📊Monitoreo y Resultados