🌺 Protocolo TTC (Cloruro de 2,3,5-Trifenil Tetrazolio)
📊 Tabla Principal de Concentraciones
| Material Vegetal | Concentración TTC | Tiempo Incubación | Temperatura | pH Óptimo | Condiciones |
|---|---|---|---|---|---|
| SEMILLAS MADURAS | |||||
| Cattleya spp. | 0.5-1.0% (w/v) | 6-12 horas | 25-30°C | 6.8-7.2 | Oscuridad total |
| Phalaenopsis spp. | 0.3-0.7% (w/v) | 4-8 horas | 28-32°C | 7.0-7.4 | Oscuridad total |
| Dendrobium spp. | 0.4-0.8% (w/v) | 5-10 horas | 26-28°C | 6.5-7.0 | Oscuridad total |
| Oncidium spp. | 0.6-1.2% (w/v) | 8-14 horas | 24-27°C | 6.8-7.3 | Oscuridad total |
| Paphiopedilum spp. | 0.8-1.5% (w/v) | 12-18 horas | 22-25°C | 6.5-7.0 | Oscuridad total |
| Vanda spp. | 0.4-0.9% (w/v) | 6-10 horas | 28-30°C | 7.0-7.5 | Oscuridad total |
| Cymbidium spp. | 0.7-1.3% (w/v) | 10-16 horas | 20-24°C | 6.8-7.2 | Oscuridad total |
| SEMILLAS INMADURAS | |||||
| Cattleya (verdes) | 0.2-0.4% (w/v) | 3-6 horas | 25-28°C | 7.0-7.3 | Oscuridad total |
| Phalaenopsis (verdes) | 0.1-0.3% (w/v) | 2-4 horas | 28-30°C | 7.2-7.5 | Oscuridad total |
| Dendrobium (verdes) | 0.2-0.5% (w/v) | 4-7 horas | 26-28°C | 6.8-7.2 | Oscuridad total |
| TEJIDOS VEGETATIVOS | |||||
| Protocormos | 0.1-0.3% (w/v) | 2-4 horas | 25-27°C | 7.0-7.3 | Luz difusa |
| Plántulas completas | 0.2-0.4% (w/v) | 3-6 horas | 24-26°C | 6.8-7.2 | Luz difusa |
| Meristemos apicales | 0.05-0.15% (w/v) | 1-3 horas | 25-27°C | 7.0-7.4 | Luz difusa |
| Explantes radiculares | 0.3-0.6% (w/v) | 4-8 horas | 24-26°C | 6.5-7.0 | Oscuridad total |
| Pseudobulbos (secciones) | 0.4-0.8% (w/v) | 6-12 horas | 22-25°C | 6.8-7.2 | Oscuridad total |
| Hojas (segmentos) | 0.2-0.5% (w/v) | 3-7 horas | 24-27°C | 6.8-7.3 | Luz difusa |
🎯 Criterios Específicos por Género
Cattleya spp.
- Óptimo: Rojo intenso uniforme en todo el embrión
- Aceptable: Rosa fuerte con gradiente hacia el centro
- Dudoso: Coloración parcheada o irregular
- Rechazar: Coloración solo en testa, embrión blanco
Phalaenopsis spp.
- Óptimo: Rosa intenso homogéneo, embrión bien definido
- Aceptable: Rosa medio con contornos claros
- Dudoso: Coloración débil pero presente
- Rechazar: Ausencia total de color en región embrionaria
Protocormos
- Óptimo: Rosa uniforme en zona meristemática
- Aceptable: Gradiente rosa desde ápice a base
- Dudoso: Coloración irregular o en parches
- Rechazar: Solo coloración superficial
🧬 Preparación de Soluciones de Trabajo
Solución Madre TTC (5% w/v)
• Cloruro de 2,3,5-Trifenil Tetrazolio: 5.0 g
• Agua destilada estéril: 100 mL
• Conservación: Refrigerado (4°C), máximo 1 semana
• Protección: Frasco ámbar (fotosensible)
• Agua destilada estéril: 100 mL
• Conservación: Refrigerado (4°C), máximo 1 semana
• Protección: Frasco ámbar (fotosensible)
Buffer Fosfato pH 7.0 (0.1 M)
• Na₂HPO₄ · 12H₂O: 3.58 g
• KH₂PO₄: 1.36 g
• Agua destilada: 1000 mL
• Ajustar pH con NaOH 0.1N o HCl 0.1N
• KH₂PO₄: 1.36 g
• Agua destilada: 1000 mL
• Ajustar pH con NaOH 0.1N o HCl 0.1N
Soluciones Específicas
Para Semillas Cattleya (Solución Estándar)
• Solución madre TTC 5%: 20 mL
• Buffer fosfato pH 7.0: 80 mL
• Concentración final: 1.0% TTC
• Volumen total: 100 mL
• Uso inmediato tras preparación
• Buffer fosfato pH 7.0: 80 mL
• Concentración final: 1.0% TTC
• Volumen total: 100 mL
• Uso inmediato tras preparación
Para Semillas Phalaenopsis (Alta Sensibilidad)
• Solución madre TTC 5%: 14 mL
• Buffer fosfato pH 7.2: 86 mL
• Glucosa: 0.1 g (estimulante metabólico)
• Concentración final: 0.7% TTC
• Buffer fosfato pH 7.2: 86 mL
• Glucosa: 0.1 g (estimulante metabólico)
• Concentración final: 0.7% TTC
Para Protocormos (Ultra-Suave)
• Solución madre TTC 5%: 6 mL
• Buffer fosfato pH 7.1: 94 mL
• Manitol: 0.5 g (osmoprotector)
• Concentración final: 0.3% TTC
• Buffer fosfato pH 7.1: 94 mL
• Manitol: 0.5 g (osmoprotector)
• Concentración final: 0.3% TTC
🎨 Interpretación de Resultados
Escala de Coloración y Viabilidad
| Coloración Observada | Color | % Viabilidad | Interpretación |
|---|---|---|---|
| Rojo intenso/carmín | 90-100% | Altamente viable | |
| Rosa fuerte | 70-89% | Viable | |
| Rosa medio | 50-69% | Moderadamente viable | |
| Rosa claro | 30-49% | Baja viabilidad | |
| Rosa muy tenue | 10-29% | Muy baja viabilidad |