Medios de Cultivo para Orquídeas

⚠️ Seguridad en el Laboratorio

Antes de comenzar: Use gafas de seguridad, guantes de nitrilo, bata de laboratorio. Trabaje en campana extractora o área bien ventilada. Todos los ingredientes químicos deben manipularse con precaución.

🧬

MS Básico (Murashige & Skoog)

Básico

Uso: Medio fundamental para Phalaenopsis, Oncidium. Base para la mayoría de modificaciones.

pH: 5.6-5.8

Componentes para 1 Litro

Macronutrientes	Cantidad
NH₄NO₃	1650 mg
KNO₃	1900 mg
CaCl₂·2H₂O	440 mg
MgSO₄·7H₂O	370 mg
KH₂PO₄	170 mg

Micronutrientes	Cantidad
FeSO₄·7H₂O	27.8 mg
Na₂-EDTA	37.3 mg
H₃BO₃	6.2 mg
MnSO₄·4H₂O	22.3 mg
ZnSO₄·7H₂O	8.6 mg
KI	0.83 mg
Na₂MoO₄·2H₂O	0.25 mg
CuSO₄·5H₂O	0.025 mg
CoCl₂·6H₂O	0.025 mg

Vitaminas & Orgánicos	Cantidad
Tiamina HCl	0.1 mg
Piridoxina HCl	0.5 mg
Ácido nicotínico	0.5 mg
Glicina	2.0 mg
Mio-inositol	100 mg
Sacarosa	30 g
Agar	7 g

Procedimiento de Preparación

Preparar stock de hierro: Disolver FeSO₄·7H₂O y Na₂-EDTA en 50ml agua destilada caliente. Almacenar en frío, oscuridad.
Disolver macronutrientes en 500ml agua destilada tibia, uno por uno, agitando bien.
Añadir micronutrientes (excepto hierro), disolviendo completamente.
Agregar vitaminas y orgánicos. Añadir stock de hierro.
Ajustar volumen a 950ml con agua destilada.
Ajustar pH a 5.6-5.8 con KOH 1N o HCl 1N.
Disolver agar en microondas o baño maría. Añadir al medio.
Completar a 1L. Dispensar en frascos.
Autoclave 121°C, 15 minutos, 1.5 atm.

🔥 Esterilización

Autoclave: 121°C, 15 minutos, 1.5 atm presión
Alternativo: Olla a presión doméstica 15 psi, 20 minutos

🍌

MS + Extracto de Plátano

Estándar

Uso: Excelente para Cattleya, Dendrobium. Estimula germinación y crecimiento inicial.

pH: 5.4-5.6

Adiciones al MS Básico

Componente	Cantidad	Observaciones
Extracto plátano	100-150 ml	Plátano maduro homogenizado
Sacarosa	20 g	Reducida por azúcares del plátano
Carbón activado	2 g	Opcional, para especies sensibles
Agua de coco	50-100 ml	Opcional, potencia el efecto

🍌 Preparación del Extracto de Plátano

Método A (Fresco): Pelar 2-3 plátanos maduros, homogenizar en 200ml agua destilada, filtrar con gasa estéril.

Método B (Cocido): Hervir plátanos pelados 10 min, homogenizar, filtrar. Más estable.

Procedimiento Modificado

Preparar MS básico hasta el paso 5 (antes de ajustar pH).
Preparar extracto de plátano fresco según método elegido.
Añadir extracto de plátano al medio, mezclar bien.
Opcional: Añadir agua de coco si se usa.
Ajustar pH a 5.4-5.6 (el plátano acidifica ligeramente).
Añadir carbón activado si se requiere.
Disolver agar, completar volumen a 1L.
Dispensar y esterilizar como MS básico.

📝 Notas Importantes

Ventajas: Estimula regeneración de PLB (cuerpos protocormoides), mejora tasa de germinación
Duración: Usar dentro de 4-6 semanas, el plátano puede fermentar
Color: Medio tendrá tinte amarillento, es normal

💙

VW (Vacin & Went)

Avanzado

Uso: Especializado para Vanda y orquídeas epífitas delicadas. Menor concentración de sales.

pH: 5.0-5.2

Composición VW para 1 Litro

Macronutrientes	Cantidad
Ca(NO₃)₂·4H₂O	1000 mg
KNO₃	525 mg
MgSO₄·7H₂O	250 mg
NH₄H₂PO₄	250 mg
KCl	65 mg

Micronutrientes	Cantidad
FeSO₄·7H₂O	25 mg
MnSO₄·4H₂O	7.5 mg
ZnSO₄·7H₂O	1.0 mg
H₃BO₃	1.0 mg
CuSO₄·5H₂O	0.2 mg
Na₂MoO₄·2H₂O	0.1 mg

Orgánicos Especiales	Cantidad
Extracto levadura	2 g
Peptona	2 g
Sacarosa	15 g
Carbón activado	1 g
Agar	15 g

Preparación VW

Disolver macronutrientes en 600ml agua destilada tibia.
Preparar stock de micronutrientes por separado (10x concentrado).
Añadir 100ml de stock de micronutrientes al medio.
Disolver extracto de levadura y peptona completamente.
Ajustar pH a 5.0-5.2 (más ácido que MS).
Añadir sacarosa y carbón activado.
Disolver agar (mayor concentración para firmeza).
Completar a 1L, dispensar, esterilizar.

⚠️ Consideraciones Especiales

pH crítico: Vanda prefiere medios más ácidos
Carbón activado: Esencial para absorber compuestos tóxicos
Agar concentrado: Proporciona soporte físico mejor para raíces aéreas

👠

P668 (Terrestres)

Especializado

Uso: Fórmula original ampliamente usada en propagación de orquídeas, probada para funcionar con la mayoría de epífitas y muchas terrestres

pH: 6.0-6.5

Composición P668 para 1 Litro

Base MS Modificada	Cantidad
MS Macronutrientes	Estándar
MS Micronutrientes	½ concentración

Modificaciones P668	Cantidad
Peptona	2000 mg
Extracto carne	1000 mg
Extracto levadura	1000 mg
Triptona	1000 mg
Sacarosa	10 g
Fructosa	10 g
Carbón activado	1000 mg

Preparación P668

Preparar MS base con micronutrientes a ½ concentración.
Disolver peptona y extractos proteicos en agua tibia.
Añadir la mezcla proteica al medio MS base.
Disolver azúcares (sacarosa y fructosa) por separado.
Ajustar pH a 6.0-6.5 (más alto para terrestres).
Añadir carbón activado, mezclar bien.
Disolver agar, completar volumen.
Filtrar si hay partículas, esterilizar.

🌱 Aplicaciones Específicas

Paphiopedilum: Diluir P668 al 75% de concentración
Cypripedium: Añadir 5g/L de humus esterilizado
Germinación: P668 a media fuerza con 20g/L sacarosa para germinación de la mayoría de epífitas

🌾

Cymbidium Especializado

Estándar

Uso: Optimizado para vernalización y germinación estacional de Cymbidium.

pH: 5.8-6.0

Base MS + Modificaciones

Componente	Cantidad	Función
MS completo	Estándar	Base nutricional
Agua de coco	100 ml	Estimula germinación
Extracto malta	3 g	Carbohidratos complejos
Sacarosa	15 g	Reducida para vernalización
Manosa	5 g	Estimula raíces
Carbón activado	0.5 g	Detoxificación

Protocolo Cymbidium

Preparar MS base estándar hasta pH ajustado.
Añadir agua de coco fresca o comercial estéril.
Disolver extracto de malta en agua tibia.
Mezclar azúcares (sacarosa y manosa).
Ajustar pH final a 5.8-6.0.
Añadir carbón activado, disolver agar.
Dispensar, esterilizar normalmente.
Incubar a 15°C por vernalización.

❄️ Protocolo de Vernalización

Fase 1: Sembrar semillas, incubar a 15°C por 4-6 semanas
Fase 2: Trasladar a 25°C para germinación activa
Fotoperiodo: 12h luz/12h oscuridad durante vernalización

🔬

Knudson C (Histórico)

Básico

Uso: Medio clásico, simple y económico. Bueno para comparaciones y especies rústicas.

pH: 5.2-5.4

Knudson C - 1 Litro

Macronutrientes	Cantidad
Ca(NO₃)₂·4H₂O	1000 mg
(NH₄)₂SO₄	500 mg
KH₂PO₄	250 mg
MgSO₄·7H₂O	250 mg

Micronutrientes	Cantidad
FeSO₄·7H₂O	25 mg
MnSO₄·4H₂O	7.5 mg
Tartrato férrico	28 mg

Orgánicos	Cantidad
Sacarosa	20 g
Agar	15 g

Preparación Knudson C

Disolver macronutrientes en 700ml agua destilada.
Añadir micronutrientes, mezclar bien.
Disolver sacarosa completamente.
Ajustar pH a 5.2-5.4 (más ácido).
Disolver agar con calor.
Completar a 1L, dispensar.
Esterilizar 121°C, 15 minutos.

📚 Valor Histórico

Ventajas: Económico, probado, simple
Limitaciones: Menos efectivo que medios modernos
Uso actual: Control en experimentos, especies rústicas

🧪

Preparación de Stocks

Estándar

Uso: Soluciones madre para preparación eficiente de medios en lotes grandes.

Stocks MS (10x Concentrado)

Stock A (Macros)	Para 1L Stock	Uso
NH₄NO₃	16.5 g	100ml/L medio final
KNO₃	19.0 g
CaCl₂·2H₂O	4.4 g
MgSO₄·7H₂O	3.7 g
KH₂PO₄	1.7 g

Stock B (Micros)	Para 100ml Stock	Uso
H₃BO₃	62 mg	10ml/L medio final
MnSO₄·4H₂O	223 mg
ZnSO₄·7H₂O	86 mg
KI	8.3 mg
Na₂MoO₄·2H₂O	2.5 mg
CuSO₄·5H₂O	0.25 mg
CoCl₂·6H₂O	0.25 mg

Stock C (Hierro)	Para 100ml Stock	Uso
FeSO₄·7H₂O	278 mg	10ml/L medio final
Na₂-EDTA	373 mg	10ml/L medio final

Preparación de Stocks

Stock A: Disolver cada macro por separado, combinar. Refrigerar máx. 1 mes.
Stock B: Disolver en orden de cantidad. Almacenar oscuro, frío, máx. 2 meses.
Stock C: Calentar agua a 60°C, disolver EDTA primero, luego FeSO₄. Color amarillo-verdoso normal.
Stock Vitaminas: Preparar fresco cada vez o congelar alícuotas.
Control calidad: Verificar precipitados antes de usar.
Etiquetado: Fecha, concentración, condiciones almacenamiento.

📦 Almacenamiento de Stocks

Temperatura: 4°C refrigerador
Recipientes: Botellas ámbar o envueltas en aluminio
Duración: Macros 1 mes, Micros 2 meses, Hierro 1 semana
Verificación: Observar precipitados, cambios de color

⚗️

Aditivos y Modificaciones Especiales

Avanzado

Uso: Complementos específicos para optimizar medios según necesidades particulares.

Aditivos Estimulantes

Aditivo	Concentración	Efecto
Agua de coco	50-200 ml/L	Estimula crecimiento, citocininas naturales
Jugo de tomate	50-100 ml/L	Mejora color, vitaminas
Extracto levadura	1-5 g/L	Aminoácidos, vitaminas B
Peptona	1-3 g/L	Fuente nitrógeno orgánico
Triptona	0.5-2 g/L	Proteínas hidrolizadas

Carbohidratos	Concentración	Aplicación
Sacarosa	10-30 g/L	Estándar universal
Fructosa	5-15 g/L	Mejor para Cattleya
Glucosa	5-10 g/L	Absorción rápida
Manosa	2-8 g/L	Desarrollo raíces
Trehalosa	5-15 g/L	Protección osmótica

Modificaciones por Género

Phalaenopsis: MS + 30g/L sacarosa + 2g/L carbón activado
Cattleya: MS + 100ml/L plátano + 20g/L sacarosa + 10g/L fructosa
Vanda: VW + 1g/L carbón + 15g/L sacarosa + 50ml/L agua coco
Dendrobium: MS + 3g/L extracto malta + 25g/L sacarosa
Oncidium: MS + 100ml/L jugo tomate + 25g/L sacarosa
Paphiopedilum: P668 diluido 75% + 5g/L trehalosa

✅

Control de Calidad

Estándar

Verificaciones Pre-Uso

Aspecto	Normal	Problemático
Color	Claro, translúcido	Amarillo, turbio, precipitados
pH	5.6-5.8 (MS)	<5.0 o >6.5
Consistencia	Gel firme	Muy blando o muy duro
Esterilidad	Sin crecimiento 48h	Bacterias, hongos visibles

Tests de Control

Test esterilidad: Incubar 5 frascos vacíos 48h a 28°C
Verificar pH: Medir en medio líquido antes de agar
Test germinación: Usar semillas control conocidas
Inspección visual: Buscar precipitados, separación fases
Documentación: Registrar lote, fecha, observaciones

🚨 Problemas Comunes y Soluciones

Medio muy blando: Aumentar agar a 8-10g/L
Precipitados blancos: Revisar orden de disolución, pH muy alto
Contaminación recurrente: Verificar autoclave, técnica aséptica
Baja germinación: Revisar viabilidad semillas, edad del medio

📦 Almacenamiento de Medios Preparados

Temperatura: 4°C en refrigerador (no congelar)
Duración máxima: 4-6 semanas para medios con orgánicos, 2-3 meses MS básico
Contenedores: Frascos de vidrio con tapa hermética, polipropileno autoclavable
Etiquetado: Tipo medio, fecha preparación, lote, pH final
Uso: Dejar equilibrar temperatura ambiente antes de siembra